Cómo etiquetar productos de sustrato de proteasa

November 6

Cómo etiquetar productos de sustrato de proteasa

Las proteínas son un componente de cada célula en el cuerpo. Proteasas (también contempladas como proteinasas enzimas proteolíticas) son enzimas digestivas cuya función es a las proteínas de la avería. Además de la digestión, las proteasas son también esenciales para el control de la coagulación de la sangre, metabolismo y regulación inmune. Durante el proceso bioquímico (catálisis), los sustratos se unen al sitio activo de la enzima y se transforman en uno o más productos que luego son liberados en el sitio de. Este proceso puede ser aumentado o inhibido para aumentar o reducir las reacciones en el cuerpo, dependiendo del resultado deseado. Etiquetado de productos de sustrato permite a los científicos medir esta actividad enzimática. Etiquetado fluorescente es una técnica utilizada para colorear moléculas particulares, haciéndolos más fáciles de seguir.

Instrucciones

Cómo etiquetar productos de sustrato de proteasa

• Elegir el tinte fluorescente. Colorantes comunes incluyen rodamina y fluoresceína. Estos normalmente se pueden comprar de fabricantes.

• Ejecutar la reacción y quitar fluoróforo de moléculas Diana mediante cromatografía por exclusión de tamaño (un proceso que separa las moléculas según su tamaño). Columnas de extracción de tinte también se utilizan. Estos a menudo se publicitan con etiqueta kits.

• Detectar las moléculas. Utilice una fluorescencia lectura instrumento como un microscopio de fluorescencia. Luz de una determinada longitud de onda se pasa a través de la molécula (indirectamente para algunas técnicas), iluminando el fluoróforo.

• Tome sus medidas. Porque los análisis miden cuánto substrato se consume o la cantidad de producto lanzado durante un período de tiempo, cantidades de la enzima pueden ser medidos en moles (cantidad física) o en unidades de enzima (actividad).

Consejos y advertencias

  • Ser conscientes de la naturaleza de su etiqueta antes de usar. Etiquetas de afinidad, por ejemplo, son tóxicas debido a su comportamiento de no discriminar, por lo que tienen una limitada utilidad.