Técnica de perfusión

by admin 08/01/2011

La técnica de perfusión proporciona una fijación rápida y uniforme a todas las células individuales presentes en el tejido. Un fijador de paraformaldehído al 4% se pasa a través del sistema vascular para obtener tejido de interés. El sitio de destino principal para la administración de la droga en un órgano particular puede identificarse con la ayuda de esta técnica. Perfusión también ha ayudado a los científicos a comprender la organización estructural y funcional del cerebro humano.

Instrucciones

• Preparar fresco paraformaldehído al 4% mezclando 40 g de paraformaldehído en 800 ml de agua. Calentar la solución a 60 ° C mientras que revuelve. Enfriar la solución a 4 C. ajustar el pH a 9,5 con la ayuda de un medidor de pH. Para ajustar el pH, agregar de ácido acético glacial para obtener el pH deseado.

• Configurar la bomba de perfusión. Coloque todas las piezas de vidrio y una aguja de perfusión. Ejecutar 100 ml de agua a través del tubo de la bomba de perfusión para eliminar cualquier residuo de las piezas de vidrio. Coloque un vaso de precipitados de fijador en una caja de hielo.

• Abra el extremo del tubo de perfusión y colóquelo en un vaso de fijador. Aumentar el volumen de solución según el tamaño del animal. Ajustar la válvula de bomba de perfusión a un goteo lento y constante. Cerrar la válvula. Llene el aparato de perfusión con solución salina 0.9% (peso/volumen).

• Establecer los instrumentos de cirugía cerca de la mesa de operaciones. Poner una inyección de anestesia al animal según su peso corporal (ketamina 0,5 mg/kg). Coloque el animal en la mesa de operaciones con su espalda hacia abajo.

• Hacer un corte con un bisturí, a lo largo de la longitud del diafragma. Con las tijeras grandes, embotado hacia abajo, cortar los tejidos conectivos en la parte inferior del diafragma. Exponer el corazón. Sostenga el corazón con las pinzas e insertar una aguja en el ventrículo izquierdo.

• Abra la válvula de la bomba de perfusión para permitir el flujo de solución salina 0.9%. Asegúrese de que la solución fluye libremente y el animal está vivo. El corazón del animal debe estar batiendo continuamente. Una vez que la sangre se sustituye por una solución salina, cambiar la solución de paraformaldehído al 4%.

• Parar la perfusión y disecar un tejido de interés. Mantener el tejido en el mismo medio a 4 C.

Related posts