Protocolos de Biotinilación

by admin 01/12/2011

Biotinilación es el proceso de vincular la biotina o vitamina H, con una proteína u otras moléculas. Este procedimiento científico se utiliza sobre todo en biotecnología y biología molecular investigación con ADN, proteínas y antígenos, que son moléculas que el sistema inmunológico reconoce como invasores. Biotinilación protocolos incluyen el biotinylation de anticuerpos y péptidos, así como Biotinilación superficial de la célula.

Biotinilación de anticuerpos

Para vincular la biotina para producir las proteínas de anticuerpos cuando un antígeno entra en el cuerpo, los técnicos usan bicarbonato de sodio (NaHC03) a pH 9; dimetil sulfóxido (DMSO);

NHS-biotina y una sustancia salina llaman PBS. Las muestras son mezcladas con bicarbonato de sodio, que se agrega más adelante a la NHS-biotina en DMSO. La solución es entonces los anticuerpos analizados e incuba en una pieza de equipo llamado un rotador durante cuatro horas a temperatura ambiente o durante la noche a 39,2 grados Fahrenheit. Por último, la solución se diluye con PBS.

Biotinilación superficial de la célula

En el protocolo de Biotinilación superficial de células, cultivo de tejidos de uso técnicos, solución salina con tampón fosfato (PBS) a pH 7.4 y sulfosuccinimidyl - 2-(biotinamido) etil-1, 3-dithiopropionate tampón para equilibrar la acidez que contiene grupos amino y TrisCl, según los protocolos actuales en Science.The de proteína que las células se mezclan con la solución tampón y biotina, decantada y se centrifugó. Contenido sólido y proteínas específicas se analizan más adelante en una placa de gel de electroforesis.

Biotinilación de péptidos

Para realizar el biotinylation de péptidos, el reactivo utilizado es biotina NHS-SS, según Philip Shepherd en "anticuerpos monoclonales: un enfoque práctico." Péptidos son pequeños fragmentos de aminoácidos, las moléculas que forman las proteínas y el ADN. En el presente Protocolo, la solución comercial NHS-SS biotina se disuelve en agua. Luego se añade la muestra de péptido, junto con bicarbonato de sodio para equilibrar la acidez o el pH. La solución entonces se incuba en hielo durante dos horas. Técnicos pueden observar la muestra con o sin las moléculas de biotina.

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