Diferencias entre ELISA directa e indirecta

by admin 04/05/2010

Un análisis enzima-ligado del inmunosorbente (ELISA) consiste en la reacción de un anticuerpo-enzima complejo con un antígeno o anticuerpo a cabo inmóvil sobre una superficie sólida. De incubación de la enzima conjugada con un sustrato adecuado, se forma un producto. La formación de un producto ayuda a detectar la presencia del antígeno o el anticuerpo y su cantidad proporciona una medida de la cantidad de reacción antígeno-anticuerpo que se produjo. La prueba de ELISA se puede realizar en dos formas: directa e indirecta.

Formato de la prueba

En la prueba directa de ELISA, un anticuerpo primario se lleva a cabo en las paredes de una placa de microtitulación. Cuando la muestra sospecha que contienen el antígeno se añade, hay una reacción antígeno-anticuerpo. A continuación, se añade un anticuerpo secundario ligado a enzimas que es capaz de reaccionar con el antígeno. Si el antígeno está presente en la muestra, se une a este anticuerpo enzima-ligado. Cuando se añade un sustrato incoloro, si se desarrolla color, indica la presencia de antígeno. En la prueba de ELISA indirecta, antígeno se realiza en las paredes de la placa de microtitulación. Cuando se agrega una muestra que se sospecha que contienen anticuerpos, se produce una reacción antígeno-anticuerpo. A continuación, se añade un anticuerpo secundario ligado a enzimas capaces de reacción con la región independiente del anticuerpo. Cuando se agrega el sustrato incoloro, conduce al desarrollo de color si la muestra contiene anticuerpos.

Facilidad de prueba

Una amplia variedad de anticuerpos secundarios marcados están comercialmente disponibles. Además, es posible crear varios anticuerpos primarios en una determinada especie y utilizar el mismo anticuerpo secundario para la detección. Esto facilita la prueba de ELISA indirecta para llevar a cabo. En la prueba de ELISA directa, los anticuerpos primarios debe estar específicamente preparado para reaccionar con el antígeno específico de la sospecha de estar presente en la muestra. Esto hace que el ELISA directo desventajoso en comparación con la prueba indirecta.

Rapidez de la prueba

La prueba de ELISA directa es rápida en comparación con la prueba indirecta, ya que utiliza sólo un único anticuerpo. El método ELISA indirecto requiere un paso adicional de incubación con un segundo anticuerpo durante el procedimiento de la prueba, que causa un retraso en la obtención de resultados.

Sensibilidad

La prueba de ELISA directa es menos sensible que la forma indirecta de la prueba porque hay mucho menos amplificación de la señal. Además, el etiquetado del anticuerpo primario con una enzima puede perjudicar su perfil immonoreactivity. En el caso de la prueba de ELISA indirecta, el anticuerpo primario no está etiquetado y por lo tanto, conserva su immunoreactivity. Además, cada anticuerpo primario posee numerosos epítopos que pueden enlazar con el anticuerpo secundario; Esto permite la amplificación de la señal, mejorando la sensibilidad del método. Sin embargo, hay una probabilidad de reactividad entre el antígeno y el anticuerpo secundario, llevando a un error en los resultados de los cruzada. No hay ninguna posibilidad en el método de ELISA directo.

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