Cómo probar la concentración de enzimas de amilasa

by admin 11/05/2010

Cómo probar la concentración de enzimas de amilasa

Las enzimas de la amilasa se producen en el páncreas y en las saliva glándulas y ayudan a digerir y proceso de hidratos de carbono. Cuando el páncreas se enferma, la amilasa se libera en el torrente sanguíneo. Cuando un paciente está experimentando problemas de tubo digestivo o enfermedad del páncreas, un médico ordenará un examen de sangre para establecer el nivel de amilasa en la sangre. El monitoreo de los niveles de la enzima amilasa, obtendrá toda la información sobre la progresión de la enfermedad y los efectos del tratamiento.

Instrucciones

Preparación de una curva estándar de almidón

• Encender el espectrofotómetro y ajuste a una longitud de onda de 620 nm. Que el instrumento se caliente durante un mínimo de 10 minutos para que la respuesta sea estable durante el experimento.

• Establece seis tubos de ensayo, etiquetarlos 1-6 y colocar en un bastidor de tubo de ensayo. Organizar las soluciones de almidón, agua desionizada y KI/yodo solución sobre la mesa.

• El tubo de llenado 1 con 3 ml de agua desionizada con una pipeta; Esto servirá como el espacio en blanco. Se llenan los tubos 2-6 ml 3,0, 2,9 ml, ml 2,7, 2,4 ml y 2.1 ml de agua desionizada respectivamente. Añadir solución de almidón a cada uno de los tubos 2-6 en el siguiente orden: tubo 2 obtiene 0 ml, tubo 3 obtiene 0,1 ml, tubo 4 obtiene 0.3 ml, tubo 5 0.6 ml y tubo 6 ml 0,9.

• Añada una gota de solución de KI/yodo a cada uno de los seis tubos. Homogeneizar cuidadosamente cada tubo antes de grabar su absorbancia en el espectrofotómetro.

• Llene la cubeta con la solución en blanco, limpie el exterior de la cubeta y colocar en el agujero en blanco del espectrofotómetro. Ajustar la absorbancia a cero. Todas las demás soluciones dará una absorbancia positiva.

• Llene la cubeta de muestra con cada una de las otras cinco soluciones a su vez. Limpie el exterior de la cubeta antes de cada medición. Registre el valor de absorbancia de cada tubo. Enjuagar la cubeta con la solución nueva al menos una vez antes de llenar para la prueba.

• Hacer una gráfica que traza las lecturas de absorbancia contra concentración de almidón. Se trata de la curva estándar que le permite determinar la concentración de una solución que tiene una absorbancia determinada lectura.

Determinar la concentración de amilasa

• Limpie los tubos de ensayo de la primera parte de la prueba. Conservar el tubo blanco para su uso posterior.

• Obtener una muestra de sangre del paciente. Colocar la muestra en una centrífuga y separar los glóbulos rojos desde el plasma sanguíneo.

• Llene un tubo de ensayo con 9 ml de agua desionizada y 1 ml de plasma de sangre. Se trata de un 1:10 dilución del plasma. Homogeneizar el tubo y tubo de la pipeta 1 ml de la solución en una segunda prueba. Rotule los dos tubos con su contenido.

• Preparar para llevar a cabo una prueba cronometrada. Tiene un cronómetro de mano y set up siete tubos de ensayo con cubetas en el bastidor de tubo de ensayo. Tome las lecturas cada dos minutos una vez que comience la prueba. Registrar la hora exacta y la absorbancia de la lectura para cada uno de los siete puntos. Llene cada uno de los siete tubos de ensayo con 2 ml de agua desionizada.

• Añadir 9 ml de la solución de almidón al tubo de ensayo con 1 ml de 1:10 dilución del plasma. Tan pronto como empiezas a agregar la solución de almidón, inicie el cronómetro. Mezclar el tubo de ensayo bien y pipetee 1 ml de la solución de almidón, plasma en el primero de los siete tubos de ensayo. Registrar el tiempo. Añadir 1 gota de solución de KI/yodo al tubo de ensayo y mezclar.

• Traslado a la cubeta, limpiar el exterior y registre la absorbancia. Repita el proceso con los restantes seis tubos de ensayo a intervalos de dos minutos. En la conclusión de la prueba cronometrada debe tener lecturas para el tiempo y absorbancia para la época abarca de 0, 2, 4, 6, 8, 10 y 12 minutos.

• Utilice la curva estándar para encontrar la concentración de almidón de cada uno de los siete puntos. Estos puntos se va disminuyendo con el tiempo. La amilasa digiere el almidón y con el tiempo consume todo el almidón disponible.

• Gráfico los datos de puntos para la prueba cronometrada como concentración de almidón frente al tiempo. La pendiente de esta curva indica la cantidad de amilasa en la muestra de plasma.

Consejos y advertencias

  • Recuerde enjuagar la cubeta con la muestra a ser examinada al menos una vez.
  • Limpie el exterior de la cubeta cada vez antes de la medición de una muestra.

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